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第 1 回実験I：酵素活性測定とタンパク質定量（PNP検量線・吸光度）实验I：酶活性测定与蛋白质定量（PNP检量线·吸光度）開く

🎯 要点 / 重点

酵素活性は基質から生じる生成物（PNP）の量を吸光度で測る。PNPは405 nmで吸収する。酶活性通过测量生成物PNP的量来定，PNP在405nm吸收。
PNP検量線：濃度と吸光度は比例（Beerの法則）。本実験では 0.01–0.05 mM で A405＝0.028–0.138、ほぼ直線。PNP检量线：浓度与吸光度成正比（比尔定律）；本实验0.01–0.05mM对应A405 0.028–0.138，近直线。
検量線の傾きは約 2.76 /mM。これで未知サンプルの吸光度→濃度に換算できる。检量线斜率约2.76/mM，可把未知样品的吸光度换算成浓度。
タンパク質量は 280 nm の吸収（芳香族アミノ酸）や色素法（Bradfordなど）で定量する。蛋白质量用280nm吸收（芳香族氨基酸）或染料法（如Bradford）定量。
各分画(#)の吸光度を測り、活性とタンパク質の溶出プロファイルを描く。测各分画(#)的吸光度，画出活性和蛋白质的洗脱曲线。
測定前にブランク（緩衝液）で装置をゼロ合わせする。测定前用空白（缓冲液）把仪器调零。

⚠️ つまずき / 容易错

❌ ブランクを取らずに測定する → ✅ 緩衝液でゼロ合わせしないと、吸光度に容器・溶媒の分が乗って誤差になる误：不测空白 → 对：不调零会把容器/溶剂的吸收算进去，产生误差

❌ 検量線の範囲外でも直線とみなして外挿する → ✅ 高濃度では直線から外れる。範囲外は希釈して測り直す误：超范围也当直线外推 → 对：高浓度会偏离直线，应稀释后重测

第 2 回実験II：SDS-PAGE によるタンパク質の分離实验II：用SDS-PAGE分离蛋白质開く

📌 試験メモ / 考试信息

未重合のアクリルアミドは神経毒。粉末・溶液を扱うときは手袋を着用し、皮膚に触れない・吸い込まないこと。重合後のゲルは比較的安全だが取り扱いは丁寧に。

未聚合的丙烯酰胺有神经毒性。处理粉末/溶液时戴手套，勿接触皮肤、勿吸入；聚合后的凝胶相对安全，但仍小心操作。

🎯 要点 / 重点

電気泳動：タンパク質は電場で、自分の電荷と反対の電極へ移動する。电泳：蛋白质在电场中向与自身电荷相反的电极移动。
支持体はポリアクリルアミドゲル（アクリルアミド＋BIS、APSとTEMEDで重合・架橋）。支持体是聚丙烯酰胺凝胶（丙烯酰胺＋BIS，用APS和TEMED聚合·交联）。
SDS（陰イオン界面活性剤）がタンパク質の立体構造を壊し、鎖あたり一定量結合 → 一様に負電荷。SDS（阴离子表面活性剂）破坏蛋白立体结构，每条链结合定量SDS→均匀带负电。
電荷の差が消えるので、移動度は分子量だけで決まる（分子量順に分離）。电荷差被抹平，迁移率只由分子量决定（按分子量分离）。
分離後は CBB（Coomassie Brilliant Blue R-250）で染色して可視化する。分离后用CBB（考马斯亮蓝R-250）染色显色。

⚠️ つまずき / 容易错

❌ SDSがなくても分子量順に分かれる → ✅ SDSがないと電荷と大きさの両方で動き、分子量順にならない误：没SDS也按分子量分 → 对：没SDS时受电荷和大小双重影响，不会纯按分子量

❌ バンドが下にあるほど分子量が大きい → ✅ 小さいタンパク質ほど速く（遠くまで）動くので、下のバンドほど分子量は小さい误：越靠下分子量越大 → 对：小蛋白跑得快（远），越靠下分子量越小